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RT-PCR 反應?優化及注意事項

日期:2023-06-09 01:36
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摘要:RT-PCR 反應優化及注意事項: 1、逆轉錄 PCR 時,提取 RNA 是關鍵,需分離高質量 RNA(純度和完整性)。 2、 整個操作過程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。 3、 逆轉錄過程中要謹防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。 4、 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。 5、 逆轉錄實驗應全程在冰上操作完成,操作過程應避免 RNase 污染。 6、 提高逆轉錄預熱溫度(也可根據相應逆轉錄試劑盒進行調整)。 7、 減少基因組 DNA 污染,可使用去基因組的逆轉錄試劑盒。
RT-PCR 反應優化及注意事項:

1、逆轉錄 PCR 時,提取 RNA 是關鍵,需分離高質量 RNA(純度和完整性)。

2、 整個操作過程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。

3、 逆轉錄過程中要謹防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。

4、 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。

5、 逆轉錄實驗應全程在冰上操作完成,操作過程應避免 RNase 污染。

6、 提高逆轉錄預熱溫度(也可根據相應逆轉錄試劑盒進行調整)。

7、 減少基因組 DNA 污染,可使用去基因組的逆轉錄試劑盒。

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